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钴60辐照灭菌生物指标菌(白色念珠菌)使用SOP

发布时间:2020-02-12 点击:钴60辐照灭菌剂量
  

  钴60辐照灭菌生物指标菌(白色念珠菌)使用SOP._基础医学_医药卫生_专业资料。1.目的: 建立钴 60 辐照灭菌生物指标菌——白色念珠菌 CMCC(F98 001 的使用规程,保 证正确使用,对钴 60 辐照灭菌效果进行验证。 2.适用范围: 适用于用钴 60 辐照灭菌生物指标

  1.目的: 建立钴 60 辐照灭菌生物指标菌——白色念珠菌 CMCC(F98 001 的使用规程,保 证正确使用,对钴 60 辐照灭菌效果进行验证。 2.适用范围: 适用于用钴 60 辐照灭菌生物指标菌——白色念珠菌 CMCC(F98 001 对钴 60 辐 照灭菌效果进行的监测。 3.职责: 钴 60 辐照灭菌操作人员、QA 人员、QC 微生物检验员对本标准的实施负责。 4.方法: 4.1 白色念珠菌作为供试品无菌检查的线 营养肉汤培养基 胨 10.0g,氯化钠 5.0g,牛肉浸出粉 3.0g,水 1000mL。 取上述成分混合,微温溶解,调节 pH 为弱碱性,煮沸,滤清,调节 pH 值使灭菌后为 7.2±0.2,分装,灭菌。 4.2.2 营养琼脂培养基 按上述 4.2.1 营养肉汤培养基的处方及制法,加入 14.0g 琼脂,调节 pH 使灭菌后 为 7.2±0.2,分装,灭菌。 4.2.3 硫乙醇酸盐流体培养基(用于培养好氧菌、厌氧菌 酪胨(胰酶水解 15.0g,氯化钠 2.5g,葡萄糖 5.0g,新配制的 0.1%刃天青溶液 1.0mL, 硫乙醇酸钠(或硫乙醇酸 0.3mL 0.5g,L-胱氨酸 0.5g,琼脂 0.75g,酵母浸出粉 5.0g,水 1000mL。 除葡萄糖和刃天青溶液外,取上述成分混合,微温溶解,调节 pH 为弱碱性,煮沸,滤 清,加入葡萄糖和刃天青溶液,摇匀,调节 pH 值使灭菌后为 7.1±0.2。分装至适宜的容 器中,其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层(粉红色不超过培养 基深度的 1/2。灭菌。在供试品接种前,培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的 1/5,否则,须经 100℃水浴加热至粉红色消失(不超过 20 分钟,迅速冷却,只限加热一次, 并应防止被污染。 硫乙醇酸盐流体培养基置 30~35℃培养。 4.2.3 改良马丁培养基(用于培养线g,酵母浸出 2.0g,硫酸镁 0.5g,葡萄糖 20.0g,水 1000mL。 除葡萄糖外,取上述成分混合,微温溶解,调节 pH 值约为 6.8,煮沸,加入葡萄糖溶 解后,摇匀,滤清,调节节 pH 值使灭菌后为 6.4±0.2,分装,灭菌。 改良马丁培养基置 23~28℃培养。 4.3 菌液的制备 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中,23~ 28℃培养 24~48 小时,培养物用 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1mL 含菌数小于 100cfu(菌落形成单位的菌混悬液。 4.4 稀释液、冲洗液及其制备方法 4.4.1 0.1%蛋白胨水溶液 取蛋白胨 1.0g,加水 1000mL,微温溶解,滤清,调节 pH 值至 7.1±0.2,分装,灭菌。 4.4.2 pH 7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液 取磷酸二氢钾 3.56g、磷酸氢二钠 7.23g、氯化钠 4.30g、蛋白胨 1.0g、加水 1000mL,微温溶解,滤清,分装,灭菌。 4.6 供试品的无菌检查 取本品 4 瓶,每瓶取 10mL,混匀,取 25mL 转移至 250ml 含 1%聚山梨酯-80 的 0.1%无菌蛋白胨溶液中,充分振摇使其分散,加入 β-内酰胺酶溶液(每 1 mg 盐酸头孢 噻呋 加头孢菌素酶不得少于 1000 单位,充分振摇,置 37℃水浴中加热 1 小时后,取出, 按如下方法进行检查。 取上述处理过的样品 10mL 接种至各含硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养 基的容器中。除另有外,每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不 得大于培养基体积的 10%,同时,硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于 15mL, 改良 马丁培养基每管装量不少于 10mL。每种培养基接种的管数同供试品的检验数量。 4.5 培养及观察 上述含培养基的容器按的温度培养 14 日,培养期间应逐日观察并记录是否 有菌生长。如在加入供试品后,或在培养过程中,培养基出现浑浊,培养 14 日后,不能 从外观上判断有无微生物生长,可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或划线 接种于斜面培养基上,细菌培养 2 日,线 日,观察接种的同种新鲜培养基是否 再出现浑浊或斜面是否有菌生长;或取培养液涂片,染色,镜检,判断是否有菌。 5.结果判断 若供试品管均,或虽显浑浊但经确证无菌生长,判供试品符合;若供试品 管中任何一管显浑浊并确证有菌生长,判供试品不符合,除非能充分证明试验结 果无效,即生长的微生物非供试品所含。当符合下列至少一个条件时,方可判断试验 结果无效: ⑴无菌检查试验所用的设备及的微生物结果不符合无菌检查法的要求; ⑵回顾无菌试验过程,发现有可能引起微生物污染的因素; ⑶阴性对有菌生长; ⑷供试品管中生长的微生物经鉴定后,确证是因无菌试验中所使用的物品和(或 无菌操作技术不当引起的。 试验若经确认无效,应重试。重试时,重新取同量供试品,依法重试,若无菌生长, 判供试品符合;若有菌生长,判供试品不符合。 6.注意事项: 6.1 试验所用的设备及的微生物结果应符合无菌检查法的要求; 6.2 供试品辐照灭菌的最终辐照剂量应经不同辐照剂量的筛选试验后确定。经 筛选试 验,选择符合无菌要求的最小辐照剂量做为灭菌剂量。

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