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DEPC水和DEPC处理水的区别

发布时间:2020-02-14 点击:pepc处理水
  

  DEPC水和DEPC处理水的区别_生物学_自然科学_专业资料。DEPC 水和 DEPC 处理水的区别 DEPC 即二乙基焦碳酸酯(diethylprocarbonate),可灭活各种蛋白质,是 RNA 酶的强 剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中,所有液体

  DEPC 水和 DEPC 处理水的区别 DEPC 即二乙基焦碳酸酯(diethylprocarbonate),可灭活各种蛋白质,是 RNA 酶的强 剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中,所有液体试剂都应经 DEPC 处理。在做 RNA 提取实验时,实验器具要用“DEPC 水”处理过,溶液一般都要用“DEPC 处理水”来 配制。 DEPC 处理水(即 RNAase-free ddH2O) 配制方法是:取市售 DEPC 1ml,加入 1L 待处理水(蒸馏水等)中(即终浓度含 0.1% DEPC 的水) , 经猛烈振摇后, 于室温静止数小时, 然后高压灭菌, 以除去降解 DEPC (DEPC 分解为 CO2 和乙醇)。 注意:①DEPC 是一种潜在的致癌物质,在操作中应尽量在通风的条件下进行,并避免接触 皮肤。②含有 Tris 缓冲液的溶液中,不能加入 DEPC。 DEPC 水 是指终浓度含 0.1% DEPC 的水,在 1000ml 双蒸水中加入 DEPC 原液 1ml,然后摇匀过 夜。 误区一:重复使用含 DEPC 的水处理枪头、离心管等。由于 DEPC 较贵,而且书上说 DEPC 要用高压灭菌处理去除, 于是有些人就萌发了重复使用 DEPC 的想法, 即对含有 DEPC 的水不进行高压灭菌,从而重复使用含 DEPC 的水处理枪头、离心管等。节约本是好事, 但这样的节约是无效的。为什么不能重复使用含 DEPC 的水,因为 DEPC 在水溶液中不稳 定, 极易分解, DEPC 在 pH6.0 和 pH7.0 的 PBS 缓冲液中的半衰期分别约为 20min 和 10min, DEPC 在水中的半衰期约为 30min。因此,重复使用含 DEPC 的水就不能枪头和离心管 的 RNase-free。 误区二: 必需长时间高压灭菌来彻底去除 DEPC。 用 DEPC 处理过的溶液, 在 15-20min 的高压灭菌后还可以闻到一股特殊的香味,因此有人认为高压灭菌去除 DEPC 不彻底,所 以要延长高压灭菌的时间以完全去除 DEPC。但是延长高压灭菌的时间并不需要,因为闻到 的特殊香味不是 DEPC 的, 而是 DEPC 分解产物之一的乙醇同溶液中残留的微量的羧酸 (如 甲酸和乙酸等)反应产生的挥发性脂类。这种特殊的水果香味不代表有痕量的 DEPC 残留。 误区三:溶液中 DEPC 含量约高,灭活 RNase 的效果越好。这个误区错了一半,的确, 1% DEPC 能灭活高达 1000 ng/ml 的 RNase A,而 0.1% DEPC 只能灭活少于 500 ng/ml 的 RNase A。但是溶液中残留的 DEPC 副产物会一些酶反应,例如 DEPC 副产物会体 外反应,因此 DEPC 含量越高,高压灭菌后的 DEPC 副产物就越多,越明显。

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